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        脊髓灰質(zhì)炎IgG ELISA試劑盒
        脊髓灰質(zhì)炎IgG ELISA試劑盒
        (德國(guó)IBL進(jìn)口原裝,貨號(hào):RE56921)
        德國(guó)IBL中國(guó)*代理商“深圳科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司”竭誠(chéng)為您服務(wù)
         
        1、應(yīng)用范圍
        脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體ELISA試劑盒可用于血清和血漿中抗脊髓灰質(zhì)炎特異性IgG抗體的定量檢測(cè)。此試劑盒也可用來(lái)檢測(cè)其它體液,您可從IBL公司獲取。此試劑盒僅供體外診斷用。
        實(shí)驗(yàn)結(jié)果從來(lái)都不可以作為醫(yī)學(xué)報(bào)告的*依據(jù),醫(yī)學(xué)報(bào)告還得考慮病人病史和進(jìn)行進(jìn)一步的檢測(cè)。
        2、前言說(shuō)明
        脊髓灰質(zhì)炎是一種由腸道病毒引起的傳染病,它廣泛流行于世界各地,并常常導(dǎo)致病人癱瘓和死亡。人類(lèi)目前知道的人致病性脊髓灰質(zhì)炎有三種類(lèi)型:
        1類(lèi)(Brunhilde):通常會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的癥狀。
        2類(lèi)(Lansing):出現(xiàn)稍微溫和的癥狀。
        3類(lèi)(Leon):少,但伴隨嚴(yán)重癥狀。
        脊髓灰質(zhì)炎病毒主要增生擴(kuò)展在腸道的淋巴節(jié)內(nèi),并通過(guò)糞便排泄出去。咽喉也可能會(huì)感染脊髓灰質(zhì)炎病毒,之后病毒就會(huì)在人體口腔內(nèi)。人感染脊髓灰質(zhì)炎后,病毒就可以通過(guò)單核細(xì)胞分布到其它淋巴節(jié),之后在淋巴節(jié)繁殖成各種各樣的脊髓灰質(zhì)炎病毒。在第二個(gè)viremic階段,病毒就停留在所有的器官和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的其它器官中。在90%以上感染了脊髓灰質(zhì)炎的病人都不會(huì)出現(xiàn)任何主觀癥狀。在其它剩余的病例中會(huì)出現(xiàn):伴隨低燒的非特異性疾病、頭痛和喉嚨發(fā)炎、痢疾、惡心和嘔吐。伴隨有肌肉疼痛和大腦神經(jīng)的經(jīng)典麻痹癥非常少見(jiàn)。再次康復(fù)階段要持續(xù)兩年,而且常常會(huì)出現(xiàn)持久的破壞。脊髓灰質(zhì)炎目前還沒(méi)有治療方法,僅用阿司匹林和體操的對(duì)癥治療會(huì)有些效果。在亞洲地區(qū)的很多國(guó)家中,脊髓灰質(zhì)炎仍然是地方性的,但WHO已開(kāi)始了巨大的工程來(lái)*此疾病。在歐洲會(huì)有因旅游者帶進(jìn)的脊髓灰質(zhì)炎病例存在,有時(shí)候還是致命性的。在病毒潛伏期,通過(guò)檢測(cè)糞便或咽喉沖洗物中的傳染原或檢測(cè)血液中的抗體可診斷脊髓灰質(zhì)炎。血液抗體的檢測(cè)通常是通過(guò)中和檢測(cè)進(jìn)行的,雙份血清檢測(cè)有滴度差異,所以三種類(lèi)型脊髓灰質(zhì)炎病毒必須分別檢測(cè)。zui近,脊髓灰質(zhì)炎IgG ELISA實(shí)驗(yàn)用類(lèi)似白喉和百日咳的方法進(jìn)行了改進(jìn),這種新的ELISA試劑盒可同時(shí)檢測(cè)三種類(lèi)型的脊髓灰質(zhì)炎病毒。這種血清學(xué)反應(yīng)是由既往感染或免疫接種所導(dǎo)致的。
        3、實(shí)驗(yàn)原理
        脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體檢測(cè)試劑采用酶聯(lián)免疫的原理。脊髓灰質(zhì)炎抗原包被在包被板板條的微孔上。在包被板的微孔中加入稀釋好的病人血清或即用型的標(biāo)準(zhǔn)品,之后血清中的IgG抗體會(huì)結(jié)合到固相脊髓灰質(zhì)炎抗原上。室溫下溫育1小時(shí)后,用洗滌液洗板除去未結(jié)合的物質(zhì)。之后加入過(guò)氧酶標(biāo)記的即用型抗人IgG,溫育30分鐘。之后再洗板,洗板后加入TMB底物液并溫育20分鐘,此時(shí)溶液變成藍(lán)色。加入終止液終止酶反應(yīng),溶液又藍(lán)色變成黃色,450nm處檢測(cè)OD值。IgG抗體的濃度與溶液所顯示的顏色強(qiáng)度成正比。
        4、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性
        將試劑盒儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下,有效期(標(biāo)記在標(biāo)簽上面)內(nèi)穩(wěn)定。使用前,將所有成分平衡至室溫(18-25℃)。不用的板條應(yīng)當(dāng)重新密封好,試劑瓶的蓋子要蓋好,并儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下。打開(kāi)了的試劑盒必須在三個(gè)月內(nèi)用完。
        5、樣品的采集與儲(chǔ)存
        血清,血漿(EDTA,肝素)
        按照靜脈穿刺的常規(guī)注意事項(xiàng)采集樣品,血液樣品自采集到實(shí)驗(yàn)時(shí)都必須保證其化學(xué)完整性。不要使用明顯溶血、黃疸和脂血樣品。混濁的樣品應(yīng)當(dāng)在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前離心以除去所有的顆粒性物質(zhì)。
        儲(chǔ)存
        2-8℃
        ≤-20℃
        避免太陽(yáng)直射,避免反復(fù)凍融。
        穩(wěn)定性
        48小時(shí)
        >48小時(shí)
         
        6、試劑盒成分

        4×2ml
        CAL A-D
        標(biāo)準(zhǔn)品A-d:PBS稀釋的人血清,內(nèi)含抗脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG抗體,另含0.01%的Methylisothiazolone和0.01%的Bromonitrodioxane,即用。
        1×14ml
        ENZCONJ IgG
        酶聯(lián)物:辣根過(guò)氧酶標(biāo)記的抗人IgG和蛋白緩沖液。另含0.01%的Methylisothiazolone和0.01%的Bromonitrodioxane及5mg/l的ProclinTM,即用。
        1×12×8
        MTP
        包被板:12條8孔的包被板,包被了脊髓灰質(zhì)炎抗原(純化病毒材料的疫苗,混合有1,2,3型病毒),即用。
        1×14ml
        TMB SUBS
        TMB底物液,內(nèi)含TMB,即用。
        1×14ml
        TMB STOP
        TMB終止液,0.5M的硫酸,即用。
        1×60ml
        DILBUF
        稀釋緩沖液,PBS/BSA緩沖液,內(nèi)含0.095%的疊氮鈉,即用。
        1×60ml
        WASHBUF
        CON
        洗滌緩沖液,10倍濃縮,PBS+吐溫20。
        FOIL
        粘性金屬板,溫育期間用來(lái)蓋板用。
        BAG
        塑料袋,可重新密封,用來(lái)儲(chǔ)存不用的板條。

         
        7、實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒不提供
        1)  5ul,100ul和500ul的多道移液器。
        2)  可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀。
        3)  洗板機(jī)
        4)  用于血清稀釋的試管
        5)  蒸餾水
         
        8、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說(shuō)明
        8.1成分的準(zhǔn)備

        稀釋/溶解
        成分
         
        稀釋劑
        比例
        備注
        儲(chǔ)存
        穩(wěn)定性
        60ml
        洗滌液
        加入540ml
        蒸餾水
        1:10
        如果有必要的話(huà),加熱到37℃以溶解所有晶體,混合均勻
        2-8℃
        8周

        8.2樣品的稀釋

        樣品
        稀釋
        稀釋劑
        比例
        備注
        血清/血漿
        一般規(guī)律稀釋
        稀釋緩沖液
        1:101
        5ul+500ul

        如果樣品中的IgG濃度比zui高標(biāo)準(zhǔn)品的都要高,則樣品必須進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋。
        11、實(shí)驗(yàn)步驟

        1
        給標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品(雙份檢測(cè))準(zhǔn)備足夠的板條,留一孔做空白對(duì)照。
        2
        將稀釋好的樣品、即用的標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品各100ul分別加入到相應(yīng)的微孔中,留出空白孔不要加,用來(lái)加底物液。
        3
        蓋板,室溫溫育60分鐘。
        4
        棄取孔內(nèi)反應(yīng)液,并加入300ul稀釋好的洗滌液,重復(fù)洗板3次,棄取孔內(nèi)反應(yīng)夜后在吸水紙上拍干以除去殘余液體。
        5
        在每一微孔中加入100ul即用型的酶聯(lián)物,留出空白孔不要加。
        6
        蓋板,室溫溫育30分鐘。
        7
        棄取孔內(nèi)反應(yīng)液,并加入300ul稀釋好的洗滌液,重復(fù)洗板3次,棄取孔內(nèi)反應(yīng)夜后在吸水紙上拍干以除去殘余液體。
        8
        在每一微孔中加入100ul即用型的底物液,留出空白孔不要加。
        9
        蓋板,室溫避光溫育20分鐘。
        10
        在每一微孔中加入100ul即用型的終止液以終止底物反應(yīng),空白孔也要加底物液。
        11
        充分混合,450nm處讀取OD值,溶液所顯示的顏色60min內(nèi)穩(wěn)定。

         
        12、質(zhì)量控制
            嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟的實(shí)驗(yàn)結(jié)果才是有效的。使用者必須嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)則或其它實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。就如試劑瓶標(biāo)簽所述:所有的控制品都必須建立在一個(gè)可以接受的范圍內(nèi)。如果其標(biāo)準(zhǔn)不符合要求,那么實(shí)驗(yàn)則無(wú)效,必須重做。為了能進(jìn)一步研究,每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都必須知道所有的樣品。如果實(shí)驗(yàn)背離實(shí)際結(jié)果,應(yīng)檢查以下參數(shù):試劑有效期,貯存條件,取樣器,實(shí)驗(yàn)設(shè)備,溫育時(shí)間,清洗方法。
        13、結(jié)果評(píng)價(jià)
        平均OD值是檢測(cè)OD值減去空白孔數(shù)值之后的平均值,兩孔間數(shù)值的差異不能超過(guò)10%。

         
        OD值
        矯正后的OD值
        平均OD值
        空白孔
        0.019
         
         
        標(biāo)準(zhǔn)品A(陰性質(zhì)控)
        0.112/0.134
        0.103/0.115
        0.109
        標(biāo)準(zhǔn)品B(臨界質(zhì)控)
        0.410/0.472
        0.391/0.453
        0.421
        標(biāo)準(zhǔn)品C(弱陽(yáng)性質(zhì)控)
        1.069/1.121
        1.050/1.102
        1.076
        標(biāo)準(zhǔn)品D(陽(yáng)性質(zhì)控)
        2.186/2.220
        2.167/2.201
        2.184

        上面表格只是個(gè)例子,所有數(shù)值都是當(dāng)時(shí)的溫度和條件下獲得的,因此上述數(shù)值不能當(dāng)作參考值,參考值必須從其它實(shí)驗(yàn)室去獲取。
        13.1定量評(píng)價(jià)
        脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒的即用型標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品用的是一個(gè)專(zhuān)門(mén)的單位進(jìn)行定義表述的(U/ml)。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果并且可以重復(fù)定量評(píng)價(jià)的話(huà),則結(jié)果有可能可以作為后續(xù)病人的質(zhì)控品。質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品的濃度請(qǐng)見(jiàn)試劑瓶標(biāo)簽。定量檢測(cè)時(shí),用標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品的OD值對(duì)其濃度在坐標(biāo)紙上進(jìn)行標(biāo)繪,之后每一病人樣品的濃度值可以用其OD值從此參考曲線(xiàn)上定量得到。我們可以用計(jì)算機(jī)程序自動(dòng)計(jì)算記過(guò),濃度計(jì)算時(shí),樣品的稀釋因子要重新被考慮進(jìn)去。
        14、特性
        將弱陽(yáng)性質(zhì)控重復(fù)檢測(cè)10次可以得到脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG試劑盒的板內(nèi)差異,其板內(nèi)差異小于10%。
         
        本譯文僅供參考,詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。
         
         
         
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