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        德國IBL 肺炎支原體IgM ELISA試劑盒
        德國IBL肺炎支原體IgM  ELISA試劑盒
        (貨號(hào):RE56681)
        德國IBL中國*代理商“深圳科潤達(dá)生物工程有限公司”竭誠為您服務(wù)
         
        1、應(yīng)用范圍
        此ELISA試劑盒可用于人血清中抗肺炎支原體IgM抗體的體外定性和定量檢測。
        2、前言說明
        除病毒、冠狀病毒、流感病毒、副流感病毒或腺病毒外,肺炎支原體也是傳統(tǒng)感冒的致病因子。支原體屬于柔膜體綱。其六 個(gè)真菌屬的共有特征是沒有細(xì)菌細(xì)胞避,滲透能力差,體積小。與革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌相比,其基因組明顯更小。它們依靠宿主細(xì)胞而生長,個(gè)別如寄生蟲一 樣依靠宿主有機(jī)體而生長。肺炎支原體是一種引起氣管支氣管炎和原發(fā)性非典型肺炎的致病菌。肺炎支原體感染通??砂殡S有續(xù)發(fā)性疾病,如梗塞、腦炎、慢性神經(jīng) 病和格林-巴利綜合征(GBS)。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi),除冷凝集實(shí)驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)外,ELISA是一種靈敏度較高而且可區(qū)分不同免疫球蛋白的可選方法。在急性感 染中,特異性IgA抗體比IgM產(chǎn)生得更有規(guī)律、更快。IgA濃度減少的時(shí)間比IgM要早,或是說比后來的IgG增加反應(yīng)要早。各種各樣的研究都表明,肺 炎支原體三種免疫球蛋白的檢測對(duì)監(jiān)測其臨床發(fā)展進(jìn)程是非常有必要的。
        3、實(shí)驗(yàn)原理
        此固相ELISA試劑盒利用的是夾心法。包被孔內(nèi)包被了抗原,用對(duì)人IgM有特異性的酶標(biāo)抗體來檢測樣品中的特異性抗體(此抗體可結(jié)合到包被抗原上)。底物反應(yīng)后,所顯示的顏色的強(qiáng)度與檢測到的IgM特異性抗體的量正比。樣品的結(jié)果可直接用標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得。
        4、試劑盒組成:
         
        4×2ml
        標(biāo)準(zhǔn)品A-D
        1;10;35;125U/mL,待用
        標(biāo)準(zhǔn)品A=陰性質(zhì)控           標(biāo)準(zhǔn)品B=臨界質(zhì)控
        標(biāo)準(zhǔn)品C=弱陽性質(zhì)控         標(biāo)準(zhǔn)品D=陽性質(zhì)控
        內(nèi)含抗支原體的IgM抗體,PBS(磷酸緩沖液),穩(wěn)定劑。
        1×14ml
        酶標(biāo)IgM
        紅色,待用。內(nèi)含過氧酶標(biāo)記的抗人IgM,蛋白緩沖液,穩(wěn)定劑。
        1×12×8
        包被板
        可拆,包被有特異性抗原。
        1×14ml
        TMB底物液
        含TMB
        1×14ml
        TMB終止液
        0.5M的H2SO4
        1×60ml
        稀釋液
        含PBS緩沖液,<0.1%NaN3
        1×60ml
        濃縮洗滌液
        濃縮型(10×),含PBS緩沖液,吐溫20
        粘性金屬板
        用于在溫育時(shí)遮蓋包被板
        塑料袋
        用于儲(chǔ)存不用的板條
        5、實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒不提供
        1)       RF吸附劑
        2)       移液器,體積:5;50;100;500 µL
        3)       校準(zhǔn)儀
        4)       樣品稀釋用試管(1ml)
        5)       帶試劑儲(chǔ)器8道移液器
        6)       洗滌瓶,自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)
        7)       能在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀
        8)       雙蒸水或去離子水
        9)       吸水紙,取樣吸頭和計(jì)時(shí)器
        6、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說明
        6.1成分準(zhǔn)備
        稀釋/溶解
        成分
         
        稀釋液
        比例
        備注
        貯存
        穩(wěn)定性
        60ml
        洗滌液
        加600ml
        雙蒸水
        1:10
        加熱至37°C以溶解結(jié)晶,充分混合
        2-8°C
         
        8周
        6.2樣品稀釋
        樣品
        稀釋
        稀釋液
        比例
        備注
        血清/血漿
        全部稀釋
        稀釋緩沖液
        1:101
        例:5µL+500µL
        6.3用RF吸附劑處理:
        注意
        為了避免特異性IgG和類風(fēng)濕因子的干擾,病人的血清應(yīng)當(dāng)用RF吸附劑處理(RE59059)。
        標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品千萬不要用RF吸附劑處理。
        1.
        在400µL按1:101的比例稀釋的樣品中加入20µL RF吸附劑。充分混合。
        2.
        室溫(18-25℃)下溫育≥1min(<15min)
        為了避免吸附特異性抗體,應(yīng)當(dāng)避免溫育時(shí)間>15min。
        預(yù)處理的樣品可能會(huì)是渾濁的。
        7、實(shí)驗(yàn)步驟:
        1)       加100µL標(biāo)準(zhǔn)品和已稀釋樣本于相應(yīng)反應(yīng)孔中,在定性檢測中只使用標(biāo)準(zhǔn)品B。
        2)       封板后室溫(18℃-25℃)溫育60分鐘。
        3)       移去粘性金屬板,棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次,在吸水紙上拍干。
        4)       在每一微孔中加入100µL酶聯(lián)物。
        5)       封板后室溫(18℃-25℃)溫育30分鐘。
        6)       移去粘性金屬板,棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次,在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時(shí),如果有條件的話,可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時(shí)間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產(chǎn)生。
        7)       每孔加TMB底物液100µL。
        8)       室溫(18℃-25℃)避光溫育20分鐘。
        9)       在每一微孔中加入100µLTMB終止液以終止底物反應(yīng)。輕輕搖動(dòng)包被板以使試劑混合均勻。此時(shí),顏色藍(lán)色變成黃色。
        10)    加終止液后60分鐘內(nèi)在450nm(參考波長:600-650nm)處測OD值。
        8、結(jié)果計(jì)算
        在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上或用自動(dòng)生成的方法,以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸,濃度為X軸,繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。用立體圖、4參數(shù)對(duì) 數(shù)圖或?qū)?shù)-對(duì)數(shù)圖都可獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,用標(biāo)準(zhǔn)品的每一單值進(jìn)行計(jì)算(樣品結(jié)果明顯異常的值必須刪除掉,應(yīng)使用更加合理的單值)。樣 品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得。一旦樣品稀釋了,就應(yīng)當(dāng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。如果樣品所測得的濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn),則應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說明所述對(duì)樣品進(jìn) 行稀釋,并重新檢測。
        9、結(jié)果判定:
                          > 12 U/ml  為陽性
                          8 - 12 U/ml  為可疑
                          < 8 U/ml  為陰性
        此檢測結(jié)果并不是任何治療結(jié)果判定的*因素,它應(yīng)當(dāng)結(jié)合臨床觀察和診斷結(jié)果加以判斷。
        本譯文僅供參考,詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。
         
         
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