4、貯存與穩(wěn)定性
5、樣品的采集與儲存
| 注意 | 人體內(nèi)的兒茶酚氨和間甲腎上腺素的釋放會受到一些食品和藥物的影響。因此在樣品采集前72小時內(nèi)病人應(yīng)禁止服用下列食物和藥品：維生素B，咖啡，香蕉，α甲基多巴，MAO，COMT抑制劑，還有降血壓類藥物。 |
| 注意 | 血液采集后兩小時內(nèi)，將血液樣品冷藏于2-8℃的環(huán)境下直致離心獲取血漿。 | |||
| 注意靜脈穿刺采集全血的常規(guī)注意事項。從采集到血液樣品的那一刻起到檢測時都應(yīng)保持血液樣品的化學(xué)整體性。不要使用明顯溶血、黃疸的和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁，則在實驗前應(yīng)當(dāng)離心以除去所有的微粒物質(zhì)。 | ||||
| 貯存 | 2-8℃ | ≤-20℃ | 避免熱源或太陽直射，避免反復(fù)凍融，冷凍狀態(tài)下運輸樣品。 | |
| 穩(wěn)定性 | 6h | 1個月 | ||
| 可以是自然尿液也可使用24h尿液。將病人24h內(nèi)的所有尿液都收集到，并混合于含10-15ml 6N的HCl防腐劑的試劑瓶中。 | ||
| 貯存 | ≤-20℃ | 避免熱源或太陽直射，避免反復(fù)凍融，冷凍狀態(tài)下運輸樣品。 |
| 穩(wěn)定性 | 6個月 | |
| 數(shù)量 | 標(biāo)志 | 成分 |
| 1×12×8 | MTP | 包被板，可拆，微孔中包被了抗兔IgG（羊，單克隆）。 |
| 1×6×2.5ml | CAL A-F | 標(biāo)準(zhǔn)品A-F，即用 腎上腺素:0;1.5;15;50;150ng/ml （0;8;27;82;273;819nmol/L） 去甲腎上素:0;5;15;50;150;500ng/mL （0;30;89;296;887;2955nmol/L） 多巴胺:0;12;35;115;450;2250ng/mL （0;78;228;750;2938;14688nmol/L） 內(nèi)含[-]腎上腺素， [-]去甲腎上腺素， [-]多巴胺（有生物活性）, 0.1M的HCl |
| 1×2×2.5ml | CONTROL 1+2 | 質(zhì)控品1+2 即用,含: [-]腎上腺素，[-]去甲腎上腺素， [-]多巴胺（具有生物活性）,0.1M的HCl, 具體濃度及可允許范圍請見試劑瓶標(biāo)簽. |
| 1×250μL | ENZCONJ CONC | 酶聯(lián)物 濃縮型（100×） 內(nèi)含：堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體，Tris緩沖液， HCl，0.01%的NaN3 |
| 2× | EXTRPLATE | 提取板（微孔板） 每板24孔，包被了硼酸親和凝膠。 |
| 1×60ml | EXTRBUF | 提取緩沖液 粉紅色，即用，內(nèi)含：0.016%的NaN3 |
| 2×1.25ml | COMT LYO | COMT凍干粉 內(nèi)含:兒茶酚-氧位-甲基轉(zhuǎn)移酶（豬肝），NaN3 |
| 1×2ml | COMT ADD | COMT添加劑 內(nèi)含:人血漿，穩(wěn)定劑，0.01%硫柳汞。 |
| 1×7ml | ANTISERUM DO | 去甲腎上腺素抗血清 紫羅蘭色，即用， 內(nèi)含:抗去甲腎上腺素抗體（兔），緩沖液，穩(wěn)定劑。 |
| 2×1.25ml | COENZ | 酶聯(lián)復(fù)合物 即用，內(nèi)含：S-腺苷-L-蛋白酸，穩(wěn)定劑。 |
| 1×3ml | ENZBUF | 酶緩沖液 即用，內(nèi)含：Tris緩沖液，HCl，穩(wěn)定劑。 |
| 1×17ml | RELEASEBUF | Release緩沖液 黃色，即用，內(nèi)含：0.1M的HCl，指示劑。 |
| 1×3ml | ACYLREAG | 酰化試劑 即用，內(nèi)含：二甲基甲酰胺，乙醇。 注意：有毒，高可燃性。 |
| 1×50ml | WASHBUR CONC | 洗滌液 濃縮型（10×） 內(nèi)含：Tris緩沖液，HCl，吐溫，0.2%的NaN3 |
| 1×9× | PNPP SUBS | PNPP底物片 內(nèi)含：對硝基苯磷酸（PNPP） |
| 1×27ml | PNPP BUF | PNPP底物緩沖液 即用，內(nèi)含：二乙醇胺，水，0.05%的NaN3 |
| 1×15ml | PNPP STOP | PNPP終止液 即用，內(nèi)含：1M的NaOH，0.25M的EDTA |
| 3× | FOIL | 粘性金屬板 |
1）移液器（10；10-100；100-1000μL）
2）軌道搖床（200-900rpm）
3）旋渦混合器
4）帶儲器的8通道移液器
5）洗滌瓶，自動或半自動包被板清洗系統(tǒng)
6）酶標(biāo)儀
7）雙蒸水或去離子水
8）吸水紙，取樣吸頭，計時器
| 注意 | 用于96人份檢測色試劑盒成分可分成兩次進行,下列所述體積為做48人份時所需要的量。 |
| 樣品 | 待稀釋 | 稀釋液 | 備注 |
| 血漿 | 去甲腎上腺素濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品中去甲腎上腺素的濃度 | 雙蒸水 | 提取步驟前 |
| 尿液 | 去甲腎上腺素濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品中去甲腎上腺素的濃度 | 0.1N的HCl | 提取步驟前 |
| 1） | 將標(biāo)準(zhǔn)品、已稀釋好的質(zhì)控品、已稀釋好的尿液樣品各20μL和500μL血漿樣品加入到提取板相應(yīng)的微孔中。除血漿樣品孔外，在所有的微孔中加入500μL雙蒸水以消除體積差別。 |
| 2） | 在每一微孔中加入1000μL提取緩沖液 |
| 3） | 蓋板。在軌道搖床（600-900rpm）上18-25℃的環(huán)境下提取30min。在提取過程中，液體的表面應(yīng)該會浸濕粘性金屬板，但液體的量不能超過微孔的2/3。液體是否濺出并不會影響實驗結(jié)果。 |
| 4） | 移去粘性金屬板，快速棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，在吸水紙上拍干。 |
| 5） | 每孔加入2ml雙蒸水 |
| 6） | 用新的粘性金屬板蓋板。在軌道搖床上（600-900rpm）18-25℃的環(huán)境下振蕩5min。液體是否濺出并不會影響實驗結(jié)果。 |
| 7） | 移去粘性金屬板，快速棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，在吸水紙上拍干。 |
| 8） | 每孔加入150μL提取緩沖液，再向每孔中加入50μL?；噭?，立即混合均勻。 |
| 9） | 在軌道搖床（400-600rpm）上18-25℃的環(huán)境下提取20min。（無需蓋板） |
| 10） | 快速棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，在吸水紙上拍干。 |
| 11） | 每孔加入2ml雙蒸水。 |
| 12） | 用新的粘性金屬板蓋板。在軌道搖床上（600-900rpm）18-25℃的環(huán)境下振蕩5min。液體是否濺出并不會影響實驗結(jié)果。 |
| 13） | 移去粘性金屬板，快速棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，在吸水紙上拍干。 |
| 14） | 每孔加入300μL Release緩沖液。 |
| 15） | 在軌道搖床（400-500rpm）上18-25℃的環(huán)境下振蕩30min。（無需蓋板） |
| 注意：COMT酶溶液應(yīng)在使用前直接臨時配置。 |
| 在COMT凍干粉中加入1.25ml雙蒸水，充分混和。再加入1.25ml酶聯(lián)溶液，然后再加入1.25ml酶溶液和0.40ml COMT添加劑以充分混合溶解的COMT試劑*，COMT酶溶液zui后的體積為每支4.15ml。一支可做48人份。溶液可用旋渦混合器混合，但要避免氣泡產(chǎn)生，配置好的COMT溶液可在室溫下穩(wěn)定存放1小時。 |
| 注意 | 如果要檢測腎上腺素和去甲腎上腺素，我們建議您先檢測腎上腺素。如果使用自動置換型衣液器加樣，請將取樣吸頭內(nèi)的殘余液體加入到提取板的相應(yīng)微孔內(nèi)，否則剩余的提取液不夠去甲腎上腺素檢測用。將提取板放到有一定坡度的位置上。實驗開始前，確定好腎上腺素和去甲腎上腺素的檢測孔并標(biāo)記好。 |
| 1 | 在每一微孔內(nèi)加入25ul臨時配制的COMT酶溶液，輕輕振板以使溶液混合均勻。 |
| 2 | 將提取好的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品分別25ul加入到相應(yīng)的微孔內(nèi)。在此步驟中，我們可以將取樣吸頭直接深入到COMT溶液里。加樣后，溶液顏色變成粉色，輕輕振板以使溶液混合均勻。 |
| 3 | 向每一微孔中加入50ul去甲腎上腺素抗血清（藍色）。 |
| 4 | 蓋板，在軌道搖床上（400-600rpm）18-25℃的環(huán)境下孵育120min。 |
| 稀釋 | 成分 | | 稀釋液 | 比例 | 備注 | 貯存 | 穩(wěn)定性 |
| 20ml | 洗滌液 | 180ml | 雙蒸水 | 1：10 | 充分混合 | 2-8℃ | 4W |
| 60μL | 酶聯(lián)物 | 6ml | 洗滌緩沖液（已稀釋好） | 1：101 | 臨時配置，僅能使用一次，混合時避免氣泡產(chǎn)生 | 18-25℃ | 30min |
| 4 | PNPP底物片 | 10.7ml | PNPP底物緩沖液 | | 臨時配置，僅能使用一次 | 18-25℃ | 10min |
9） 加終止液后60min內(nèi)405nm處讀取OD值。
| | 尿液 | 血漿 | ||
| μg/d | nmol/d | pg/mL | nmol/L | |
| 去甲腎上腺素 | ＜90 | ＜535 | ＜600 | ＜3.55 |
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